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GeneChip® WT(Whole Transcript) Terminal Labeling Kit
は、GeneChip® WT Sense Target(ST) Labeling Assay の
断片および標識のステップに使えるよう最適化された試薬キットです。
WT Terminal Labeling Kitは、uracil DNA glycosylase（UDG）とapurinic/apyrimidinic endonuclease 1 （APE１）を組み合わせた再現性のあるDNA断片化に利用します。典型的な出発材料はランダムプライマーから増幅された一本鎖のDNAで、GeneChip® WT cDNA Synthesis and Amplification Kit （アフィメトリクス社で別途販売）を使って調製することができます。GeneChip® WT cDNA Synthesis and Amplification Kitで調製すると、チミジンに対して一定の割合でデオキシウリジンが取り込まれます。
断片化されたDNAは、terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)を使って、GeneChip® DNA Labeling Reagentの独自のビオチン化合物の存在下で標識されます。
いずれのコンポーネントもWT Terminal Labeling Kitに含まれています。
ラベル化されたターゲットDNAは、GeneChip® Human Exon 1.0 ST Arrayのようなアレイのハイブリダイゼーションに使うハイブリカクテルに直接添加することができます。
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10X cDNA
Fragmentation Buffer |
48 µL |
144 µL |
| UDG, 10 U/µL |
10 µL |
30 µL |
| APE 1, 1,000 U/µL |
10 µL |
30 µL |
| 5X TdT Buffer |
120 µL |
360 µL |
| TdT, 30 U/µL |
20 µL |
60 µL |
| DNA Labeling Reagent, 5 mM |
10 µL |
30 µL |
| RNase-free Water |
825 µL |
2x 825 µL |
※WT Terminal Labeling Kitは、GeneChip® WT Sense Target Labeling and Control Reagents Kit (製品番号900652）のコンポーネントの一部として含まれています。
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